RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞)

細胞名稱：RKO-E6    人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞

組織來源：結(jié)腸癌，轉(zhuǎn)染插入到pCMV中的HPV E6

培養(yǎng)條件：MEM +10% FBS

形　　態(tài)：貼壁；上皮細胞樣

背　　景：RKO-E6細胞系是用脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染pCMV-E6的結(jié)腸癌RKO細胞系。該細胞含有穩(wěn)定整合受控於巨細胞病毒啟動子的人**狀病毒（HPV）E6癌基因。RKO-E6細胞系和它的母系RKO一起可用于研究p53缺失引起的細胞參數(shù)改變p53介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄和凋亡等。

RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞)操作說明：

1)對于常溫運輸?shù)募毎盏郊毎螅瑱z查是否有運輸問題，即細胞培養(yǎng)瓶或管是否破損，細胞培養(yǎng)液是否溢出。若沒有運輸問題，請75%酒精**后，保留封口膜，放入細胞培養(yǎng)箱中靜置。嚴格檢查培養(yǎng)箱的參數(shù)：溫度，濕度和CO2濃度。細胞靜置時間一般為6-12小時后，細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，即可開始后續(xù)操作。選用正確的細胞培養(yǎng)體系，RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞)嚴格按照說明書的培養(yǎng)條件進行培養(yǎng)。條件允許，培養(yǎng)的前三天內(nèi)做細胞拍照記錄，通過郵件發(fā)送給我們做及時狀態(tài)跟蹤。

2)對于干冰運輸?shù)募毎埲〕隼鋬龉芎螅毩⒓捶湃?/span>37C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。然后將其復(fù)蘇培養(yǎng)，次日更換培養(yǎng)液。

RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞)注意事項：

1)細胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細胞大部分又貼回瓶底，表明細胞活力正常，剩余漂浮的細胞可以離心去掉，留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細胞生長至匯合度80%，進行消化傳代；如細胞還是不貼壁，將細胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。

2)對于生長緩慢的貼壁細胞：可采用適當(dāng)?shù)奶岣吲囵B(yǎng)基中血清濃度，或隔日換液的方法來保證細胞的狀態(tài)和生長速度。

3)對于生長不均的貼壁細胞：在培養(yǎng)過程中若出現(xiàn)細胞分布明顯不均時（即某一區(qū)域細胞已重疊生長，而旁邊則為一塊空白），此時可將細胞進行消化，重新打散，貼壁，加入新培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。 

RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細胞)下面介紹幾種細胞培養(yǎng)過程中常見的污染：

一)桿菌污染：培養(yǎng)基中加入***可以減少此種污染，但也不是**的。

二)支原體污染：傳說中的黑焦蟲，長得暴快。24小時就滿視野都是了。污染源大多數(shù)情況下是培養(yǎng)用血清。

三)***污染：似乎無處不在，而且頑固得很。長得暴快(12h就能在細胞上面密布)。培養(yǎng)液澄清。低倍顯微鏡下像黑色的沙子鋪在細胞上，高倍鏡下呈樹枝狀或葡萄狀。

四)霉菌污染、比較常見的一種污染，常常來源于污染的空氣、水和器械。